生物化学醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的试验中,若干现象的原因分析(在线等) , 如何做好血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验 -凯发k8娱乐

分子小。醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白中条带形成的原因是因为分子小,因为带电荷多的蛋白质泳动较快,分子大而带电荷少的泳动较慢,从而可将血清蛋白分离成数条区带。

1,薄膜本身的质量问题(涂层不均匀等),2,点样技术问题,3,电压电流控制问题,4,样品本身是否有降解、污染;5,实验过程其他可能影响结果的问题,如平衡时间、浸泡时间、染脱色透明时间等.

可能存在多种因素,比如说 1.电泳时间不足 2.薄膜在染色或漂洗时重叠紧密且时间很长 3.薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足 4.点样时薄膜上是否存在多余的水分是不是还有可能与样品的配制浓度有关 注:鄙人也是一名学生,也

图谱不齐条带扭曲什么的可能是纤维膜质量不好,缓冲液有问题,电泳电压电流不稳定;拖尾或过密可能是电泳时间不足;要不就是点样没点好,点样时薄膜上还有水;透明后膜不透彻可能是染色时间太长了吧,我觉得不到10分钟就

生物化学醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的试验中,若干现象的原因分析(在线等)

(3)缓冲液量不宜太少,两槽缓冲液应同在一个水平面上。(4)调节好电流、电压,一般电压为90~150v,电流0.4~0.6ma/cm,夏季通电时间约为40分钟,冬季约为45分钟。(5)溶血可使b球蛋白增高,清蛋白降低,故应

可能存在多种因素,比如说 1.电泳时间不足 2.薄膜在染色或漂洗时重叠紧密且时间很长 3.薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足 4.点样时薄膜上是否存在多余的水分是不是还有可能与样品的配制浓度有关 注:鄙人也是一名学生,

慢性。

(2)快速省时。由于醋酸纤维素薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45—60min即可,加上染色,脱色,整个电泳完成仅需90m

电泳时间过短后果:导致漆膜太薄,甚至成膜不好。电泳漆膜具有涂层丰满、均匀、平整、光滑的优点,电泳漆膜的硬度、附着力、耐腐、冲击性能、渗透性能明显优于其它涂装工艺。采用水溶性涂料,以水为溶解介质,节省了大量有机溶

问题是由于点样后薄膜过干,或因电泳槽密闭性不良,或电流过大,温度升高,薄膜水份蒸发干燥而造成的。因此薄膜一定要充分浸透后才能点样,并注意检查电泳槽是否盖紧,电泳槽要放在远离光源热源的阴凉之处。在电泳过程中随时

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳电泳时间过长或过短有什么后果

按其在电场中移动速度之快慢可将血清蛋白质分为白蛋白、 a1球蛋白、a2 球蛋白、b球蛋白、及g球蛋白五条区带。再按区带分别测定其含量。用醋酸纤维素薄膜作为支持物进行电泳,是分离血清蛋白质的一项准确常用的技术,

血清蛋白电泳是用电泳的方法,测定血清中各类蛋白占总蛋白量的百分比。血清中的蛋白按照电泳时候的电泳速度不同,可以区分开来,分子量越小带电荷越多、泳动速度就会越快。一般可以粗略的分为清蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,

等电点都在ph 7.5以下。将血清置于ph 8.6的缓冲液电泳时,所有的血清蛋白都带有负电荷,在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同ph时所带电荷数量不等,分子颗粒大小不一,因而泳动速度不同,经电泳被分离开来。

太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎

醋酸纤维素薄膜在电泳前,一定要在缓冲液中浸透,否则有碍电泳分离,最好是浸泡过夜,效果最佳。点样时样品一定要点在无 光泽面,否则很难吸入,点样量 不宜过多(血清样品最适宜 3μl )。其原因是醋酸纤维素薄膜承受

电泳过程应选择合适的电流强度,一般电流强度为0.4ma/cm—0.5ma/cm宽膜为宜.电流强度高,尤其在温度较高的环境中,可引起蛋白质变性或由于热效应引起缓冲液中水分蒸发,使缓冲液浓度增加,造成膜片干涸.电流过低,则样品泳动

试述血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法注意事项。

一、原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于ph值低于其等电点的溶液中,则

在这次实验中,电极缓冲液ph为8.6。而几种血清蛋白的等电点(pi)均小于它。也就是说,电泳时,他们均带正电荷,在电场中向正极移动,所以要将点样端放于负极,这样,他们就会向另一个方向移动(与点样端相反)。如果

实验过程中正确指导学生操作是做好本试验的主要环节,必须加强对学生在准备、点样、电泳、通电、染色和漂洗、定量等步骤的指导,持别是在“点样”这一步骤。4.1准备 将醋酸纤维素薄膜切割成2×8cm的矩形小孩子条,在其

1将准备好的薄膜划线面朝下,与巴比妥——巴比妥钠缓冲液中充分浸透(约30min)2,电泳开始的10min内电流调为0.3ma/cm膜宽,10min后调至0.6ma/cm膜宽。电泳60min,待电泳区带展开2.5-3.5cm时断电 3,漂洗时间与

1、醋酸纤维素薄膜的预处理 市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片,薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一.将干膜片漂浮于电极缓冲液表面,其目的是选择膜片厚薄及均匀度,如漂浮15s—30s时,膜片吸水不均匀,则有白斑点或条纹,

(1)选择优质薄膜,无空泡、皱褶、厚薄不匀或霉点变质等现象。(2)样品点在薄膜毛面,点样量适宜。电泳时光面朝上,毛面朝下,以防水分蒸发干燥,同时电泳槽要密闭,以免影响电泳效果。(3)缓冲液量不宜太少,两槽缓冲液

如何做好血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验

等电点都在ph 7.5以下。将血清置于ph 8.6的缓冲液电泳时,所有的血清蛋白都带有负电荷,在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同ph时所带电荷数量不等,分子颗粒大小不一,因而泳动速度不同,经电泳被分离开来。

电泳时,电压应控制在 110 ~ 140v ,不能过高,若电压太高,产热量大,则蛋白质标本会破坏,并且电压高则带电颗粒移动速度快,分离效果不理想。醋酸纤维素薄膜在电泳前,一定要在缓冲液中浸透,否则有碍电泳分离,最好是

太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎

(2)样品点在薄膜毛面,点样量适宜。电泳时光面朝上,毛面朝下,以防水分蒸发干燥,同时电泳槽要密闭,以免影响电泳效果。(3)缓冲液量不宜太少,两槽缓冲液应同在一个水平面上。(4)调节好电流、电压,一般电压为90~

使用醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项,

做好血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的方法: 电泳时,电压应控制在 110 ~ 140v ,不能过高,若电压太高,产热量大,则蛋白质标本会破坏,并且电压高则带电颗粒移动速度快,分离效果不理想。 醋酸纤维素薄膜在电泳前,一定要在缓冲液中浸透,否则有碍电泳分离,最好是浸泡过夜,效果最佳。 点样时样品一定要点在无 光泽面,否则很难吸入,点样量 不宜过多(血清样品最适宜 3μl )。其原因是醋酸纤维素薄膜承受蛋白质有限。量过多则分子量相近的物质相互争夺迁移而重叠,影响结果观察。 电泳开始后,不能再取放薄膜,以防触电。如必需进行,要先关闭电源。 影响电泳的主要因素: 电泳介质 ph 值的影响 : 对于蛋白质和氨基酸等两性分子,电泳介质的 ph 值影响蛋白质的电离情况,即可决定蛋白质的带电量 (q) 。 ph 值小于等电点,分子带正电荷,向负极泳动,如果 ph 大于等电点,分子带负电荷,向正极泳动。 ph 值偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。当缓冲液 ph 等于其等电点时,分子处于等电状态,不移动。由于血清蛋白质的等电点多在 ph4 ~ 6 之间,因此,分离血清蛋白常用 ph 8.6 的巴比妥缓冲液或三羟甲基氨基甲烷 (tris) 缓冲液。 缓冲液的离子强度 : 离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离清晰。如离子强度过低,缓冲液的缓冲量小,不易维持 ph 的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量 ( 压缩双电层 ) 使电泳速度减慢。所以常用离子强度为 0.02 ~ 0.2 之间。 电场强度的影响 : 电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度以每厘米的电势差计算,也称电势梯度。如纸电泳的滤纸长 15cm ,两端电压 ( 电势差 ) 为 150v ,则电场强度为 150 / 15=10 v / cm ,电场强度愈高,则带电粒子的移动愈快。 随着电场强度的增高,电流强度增加,产热也增多。产热的不良后果是: ① 引起水的蒸发,改变溶液 ph 及离子强度; ② 引起介质温度高,可使蛋白质变性。因此电泳必须控制电压在一定范围之内,当进行高压电泳时,必须装备有效的冷却装置。 电渗 : 在电场中,由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电,在电场作用下,溶液就向一定方向移动,此种现象称为电渗。如纸上电泳所用的滤纸纤维素带有负电荷;琼脂糖电泳中,所用的琼脂糖由于大量硫酸根的存在也带有负电荷,它们使水感应产生水合氢离子 (h 3o) 。在外电场的作用下,水向负极移动。如果被测定样品也带正电荷,则移动更快;如果被测定样品带负电荷,则移动减慢。所以电泳时,颗粒泳动所表现的速度决定于颗粒本身的泳动速度和溶液的电渗作用。因此在选用支持物时,应尽量避免高电渗作用的物质。
可以依照以下几个线索分析: 1,薄膜本身的质量问题(涂层不均匀等), 2,点样技术问题, 3,电压电流控制问题, 4,样品本身是否有降解、污染; 5,实验过程其他可能影响结果的问题,如平衡时间、浸泡时间、染脱色透明时间等。。
临床上常用于分析血、尿等样品中的蛋白质,供临床上诊断肝肾等疾病 如急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭时,清蛋白降低,α1、α2和β-球蛋白升高;慢性活动性肝炎、肝硬化时,清蛋白降低,β、γ-球蛋白升高;急性炎症时,α1、α2-球蛋白升高;慢性。
  血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳与滤纸相比较,有以下优点 。 (1)醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“拖尾”现象,染色后背景能完全脱色,各种蛋白质染色带分离清晰,因而提高了测定的精确性。 (2)快速省时.由于醋酸纤维素薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45—60min即可,加上染色,脱色,整个电泳完成仅需90min左右。 (3)灵敏度高,样品用量少。血清蛋白仅需2μl血清,甚至加样体积少至0.1μl,仅含5μg蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医学检验利用这一点,检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。 (4)应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离,如胎儿甲种球蛋白,溶菌酶,胰岛素,组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。 (5)醋酸纤维素薄膜电泳染色后,经冰乙酸,乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板,有利于扫描定量及长期保存。
在这次实验中,电极缓冲液ph为8.6.而几种血清蛋白的等电点(pi)均小于它.也就是说,电泳时,他们均带正电荷,在电场中向正极移动,所以要将点样端放于负极,这样,他们就会向另一个方向移动(与点样端相反).
顾名思意,无光泽面才是醋酸纤维,光泽面是聚乙烯,你在光泽面点样,无异于在一块塑料布上点样,电泳时,色带不会散开,因为聚乙烯不导电,电荷不会移动俯籂碘饺鄢祭碉熄冬陇从而带动色带的散开。
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